DH10Bac甘油菌，是收集生長在對數(shù)期的DH10Bac菌，加入含有甘油的細(xì)菌凍存液制備而成�？梢灾苯觿澠桨寤蛐×俊⒋罅颗囵B(yǎng)。
DH10Bac是昆蟲桿狀病毒Bac-to-Bac系統(tǒng)中常用的同源重組大腸桿菌菌株。該菌株含有桿狀病毒穿梭載體(baculovirus shuttle vector) bMON14272(俗稱bacmid，其含有一個轉(zhuǎn)座反應(yīng)必須的mini-attTn7重組位點)和一個輔助質(zhì)粒pMON7124(用于表達(dá)轉(zhuǎn)座所需的轉(zhuǎn)座蛋白)。DH10Bac主要用作pFastBac等類似載體轉(zhuǎn)化的宿主菌株。當(dāng)pFastBac重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入DH10Bac細(xì)胞后，pFastBac載體上的mini-Tn7位點和DH10Bac宿主菌中bacmid上的mini-attTn7位點之間發(fā)生轉(zhuǎn)座(transposition)，產(chǎn)生重組的bacmid。重組的bacmid在轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后可產(chǎn)生含有重組子的桿狀病毒，后者進(jìn)一步感染昆蟲細(xì)胞后即可啟動外源重組蛋白的表達(dá)。
DH10Bac宿主包含的bacmid bMON14272含小型F復(fù)制子，卡那霉素抗性基因，mini-attTn7位點和lacZα互補(bǔ)因子(可通過藍(lán)白斑篩選)；輔助質(zhì)粒pMON7124包含四環(huán)素抗性和tnsABCD區(qū)域，該區(qū)域表達(dá)轉(zhuǎn)座反應(yīng)所需的轉(zhuǎn)座蛋白。攜帶T7轉(zhuǎn)座原件(Tn7 element)的供體質(zhì)粒pFastBac (donor pFastBac plasmid)帶有慶大霉素抗性基因，桿狀病毒多角體啟動子，多克隆位點區(qū)域和SV40的多腺苷酸化信號。
使用超級感受態(tài)細(xì)菌制備試劑盒(D0302)制備DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化在多克隆位點插入目的基因的pFastBac重組質(zhì)粒產(chǎn)生重組的bacmid，利用生產(chǎn)的桿狀病毒穿梭載體bacmid小量抽提試劑盒(D0031)提取重組bacmid DNA，將重組bacmid DNA轉(zhuǎn)染進(jìn)入昆蟲細(xì)胞(推薦使用生產(chǎn)的LipoInsect™昆蟲細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑C0551)產(chǎn)生重組桿狀病毒，擴(kuò)增重組的桿狀病毒并用其感染昆蟲細(xì)胞，就可以大規(guī)模表達(dá)重組目的蛋白。
DH10Bac菌株具有卡那霉素抗性和四環(huán)素抗性，pFastBac質(zhì)粒具有慶大霉素(Gentimicin)抗性和氨芐青霉素抗性。
DH10Bac菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG / pMON14272 / pMON7124。
重組后的克隆用藍(lán)白斑進(jìn)行篩選，重組成功的克隆在含有卡那霉素和四環(huán)素抗性的IPTG/X-Gal LB平板上呈現(xiàn)為白色菌落。
本菌株可以使用常規(guī)的LB培養(yǎng)基或SOC培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D0346 | DH10Bac甘油菌(重組Bacmid制備用菌株) | 200μl |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，一年有效。-80℃可以長期保存。
注意事項：
使用本甘油菌時可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加細(xì)菌的活力會逐漸下降。在沒有結(jié)凍的情況下，菌體會逐漸沉淀至管底，請務(wù)必注意適當(dāng)混勻后使用。
為保證菌種純正，避免其它細(xì)菌污染，盡量先劃平板然后再挑單克隆菌落進(jìn)行后續(xù)操作。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
