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肌酐(Cr)測(cè)定試劑盒(苦味酸法)

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肌酐(Cr)測(cè)定試劑盒(苦味酸法)說(shuō)明書(shū)

分光光度法50/48 

  意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:肌酐是在肌肉中從磷酸肌酸通過(guò)自發(fā)和不可逆轉(zhuǎn)化而形成的,除非肌肉質(zhì)量有大的變化,通常情況所形成的肌酐量是相當(dāng)恒定的。游離肌酐的循環(huán)量完全依賴于它的排泄速度,從而測(cè)定尿液,血清或血漿中的肌酐量,可用于腎功能檢查。肌酐含量的增高常見(jiàn)于:慢性腎衰竭時(shí)排泄量的減少及肢端肥大癥。

測(cè)定原理:肌酐與過(guò)量苦味酸在堿性條件下反應(yīng)生成橙紅色苦味酸肌酐。在波長(zhǎng)490nm處有最大吸收峰,在一定的時(shí)間內(nèi)測(cè)定該復(fù)合物,即可計(jì)算出樣本中肌酐的含量,并可避免干擾。

 

肌酐+堿性苦味酸————肌酐苦味酸復(fù)合物

自備儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、普通離心機(jī),超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。 

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1 瓶,4℃保存,臨用前過(guò)濾。

試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑三:10x 標(biāo)準(zhǔn)液×1 瓶,4℃保存,臨用前,蒸餾水10倍稀釋1x標(biāo)準(zhǔn)液,終濃度為0.1 mg/ml。

*工作液配置:試劑二:試劑一 = 1:10(臨用前配置,用多少配多少)。

樣本收集:

1.血清,血漿,血清或血漿中的肌酐在 2-8℃下可保存 24 小時(shí)。

2.尿液:試驗(yàn)前將新鮮尿液用蒸餾水作1/50稀釋,測(cè)定結(jié)果乘以50。

測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到490nm,蒸餾水調(diào)零。

2,按下表添加樣本試劑,充分混勻,置37℃水浴30秒鐘后,選擇波長(zhǎng)490nm,以空白管校零讀取起始吸光度(A1),90秒鐘后讀取終末吸光度(A2)

備注:可根據(jù)使用儀器的不同,恒比例改變?cè)噭┡c樣本的量。

注意:空白管只需要做一次

 

試劑名稱(μL

樣本管

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

樣本

100

 

 

試劑三 1X

 

 

100

蒸餾水

 

100

 

工作液

1000

1000

1000

 

注意事項(xiàng):

1、本方法的最低檢出濃度為0.03 g/L(取樣體積為0.1 mL)、線性范圍為O~l.0g/L r = O.9995, 精密度:相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.38%~2.2%(濃度為0.2~1.0g/L.n =6), 準(zhǔn)確度:尿樣加標(biāo)平均回收率為93% ~105% (肌酐濃度為0.35~0.57g/Ln = 6)。本法測(cè)定中的最小取樣量為50uL。

2、尿樣中含有0.1mg/L的鎳、汞、硒、釩,0.2mg/L的鉻,0.3mg/L的殺蟲(chóng)脒,0.4mg/L的鎘、對(duì)硝基酚,0.6mgL的鉛、砷,1mg/L的馬尿酸及甲基馬尿酸,16mg/L的2-硫代噻唑烷-4-羧酸,2mg/L的氟,3mg/L的酚,100mg/L的三氯乙酸,400mg/的扁桃酸,1000mg/L 的苯乙醛酸,不干擾測(cè)定。

3、反應(yīng)溫度、苦味酸純度及其濃度、氫氧化鈉濃度均對(duì)測(cè)定值有影響。反應(yīng)溫度必須控制在30℃以下。加水至10mL混勻后應(yīng)盡快完成標(biāo)準(zhǔn)和樣品的測(cè)定,從最先開(kāi)始測(cè)定至最后一個(gè)樣品結(jié)束,整個(gè)比色過(guò)程必須控制在30min內(nèi)完成。

4、血紅蛋白(0.1/L),膽紅素(10mg/dL),前體及蛋白質(zhì)均不干擾反應(yīng),但高濃度的還原物質(zhì)會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。

5、本產(chǎn)品在島津-UV1601PC 型儀器上通過(guò)第三方檢測(cè),用于其他儀器需進(jìn)行驗(yàn)證。

6、中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 尿中肌酐分光光度測(cè)定方法

Urine-Determination of creatinine -Spectrophotometric method)

WS/T 9 7 - 1 9 9 6

參考文獻(xiàn):

1.Fabiny DLetal.ClinChem1971:17:696

2.Young DS,etal.ClinChem1975:21:286-288

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