DPPH自由基清除率檢測試劑盒(比色法)
一、產(chǎn)品簡介：
在生命活動的代謝過程中不斷產(chǎn)生各種自由基而自由基的積累會使機(jī)體產(chǎn)生氧化損傷而引起衰老、腫瘤、中風(fēng)、心肌炎和糖尿病等慢性疾病，在眾多自由基中2，2-二苯基-1-苦基苯肼( DPPH)是一種較穩(wěn)定的自由基，當(dāng)有自由基清除劑存在時顏色由紫色向黃色轉(zhuǎn)變，吸光度隨之變小。
雅吉生物 DPPH自由基清除率檢測試劑盒(比色法)又稱氮自由基清除能力檢測試劑盒或氮自由基清除率檢測試劑盒，其檢測原理是DPPH自由基是一種較穩(wěn)定的含氮自由基，含一個單電子，溶于乙醇后溶液呈紫色，在517nm下有強(qiáng)吸收，如果有其他物質(zhì)提供一個電子與此單電子配對，溶液會褪色，褪色程度與接受電子的量呈正比，通過吸光度下降的程度來反應(yīng)樣品的氮自由基清除能力，主要用于檢測血清、植物組織、抗氧化類食品、保健品及藥品等樣本。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
二、產(chǎn)品組成：
| 名稱規(guī)格 | 100T | 存儲 |
| 試劑(A): 氮自由基提取液 | 100ml | RT |
| 試劑(B): DPPH溶液 | 100ml | 4℃避光 |
| 試劑(C): 維生素C | 10mg | 4℃ |
| 使用說明書 | 一份 | |
三、自備材料：
1、蒸餾水、無水乙醇
2、實(shí)驗(yàn)材料∶植物組織(芹菜、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等
3、研缽或勻漿器或粉碎機(jī)或超聲破碎機(jī)
4、離心機(jī)、離心管
5、恒溫水浴鍋、恒溫干燥箱
6、電子天平、30~50目篩
7、分光光度計、比色皿
四、操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品∶
①植物樣品∶取新鮮植物樣本，清洗干凈，研缽研碎(粉碎)，干燥箱烘干后過篩，稱取0.05g 樣品，加入0.8ml氮自由基提取液，40℃水浴浸提30~60min，10000rpm離心10min，上清液待用，4℃保存?zhèn)溆?亦可參考相關(guān)資料提取方法提取)。
②血漿、血清和尿液樣品︰血漿(用肝素或枸櫞酸鈉抗凝，不宜使用EDTA 抗凝)4°℃5000rpm離心10min，取上清液待用;血清或尿液樣品可直接測定。
③細(xì)胞樣品︰按每5×10°個細(xì)胞加入0.8ml氮自由基提取液，超聲破碎(功率200W,超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次)，10000rpm 離心10min，取上清液待用。
④果汁、葡萄酒等樣品︰按樣品∶氮自由基提取液=1∶9的比例震蕩混勻，10000rpm離心10min，上清液待用，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
⑤高活性樣品︰如果樣品中有效濃度較高，可用提取液進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、配制維生素C溶液︰將一支10mg維生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中，即成10mg/ml維生素C溶液;可分成0.1ml的小份，-20℃保存。
3、配制Vc標(biāo)準(zhǔn)工作液︰如需測線性關(guān)系，建議用氮自由基提取液將10mg/ml維生素C溶液稀釋至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc標(biāo)準(zhǔn)工作液;如需清除率約為100%的陽性對照，建議選用大于 30μg/ml 的Vc標(biāo)準(zhǔn)工作液。
4、分光光度計開機(jī)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長517nm(500~530nm亦可)，無水乙醇調(diào)零。
5、DPPH加樣∶按照下表設(shè)置空白管、樣本測定管、樣本對照管、陽性對照管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，混勻，室溫避光靜置30min。
| 加入物(ml) | 空白管 | 樣本測定管 | 樣本對照管 | 陽性對照管（標(biāo)準(zhǔn)管） |
| 氮自由基提取液 | 0.2 | — | — | — |
| 上清液 | — | 0.2 | 0.2 | — |
| VC標(biāo)準(zhǔn)工作液 | — | — | — | 0.2 |
| 無水乙醇 | 0.9 | 0.9 | 1.8 | 0.9 |
| DPPH溶液 | 0.9 | 0.9 | — | 0.9 |
6、OD值測定∶將各管溶液依次加入到比色皿中，用分光光度計檢測各管吸光度值，依次記為A0、A1、A2、A3。
五、計算：
陽性對照·DPPH清除率(%)= (A0- A3)/A0×100%
待測樣本·DPPH清除率(%)=[A0-( A1- A2)]/A0×100%
備注:
A0=空白管的吸光度值
A1=樣本測定管的吸光度值
A2=樣本對照管的吸光度值
A3=陽性對照管的吸光度值
六、注意事項：
1、正式測定之前建議選擇2~3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
2、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，當(dāng)天提取當(dāng)天測定。
3、不同樣本清除DPPH自由基的能力差異很大。
4、如樣本DPPH清除率大于90%，應(yīng)用提取液稀釋；如樣本 DPPH清除率小于5%，應(yīng)提高樣本用量以提高有效成分濃度。
5、樣品中不宜添加Triton、DTT等可能影響氧化還原反應(yīng)的成分。
6、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
七、有效期：6 個月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。
