馬伊氏錐蟲(T.evans)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
96T
使用目的：
本試劑盒用于測定馬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中伊氏錐蟲(T.evans)表達(dá)。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中馬伊氏錐蟲(T.evans)表達(dá)。用純化的抗體包被微孔 板，制成固相抗體，可與樣品中伊氏錐蟲(T.evans)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其 他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加 底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。 用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度 (OD 值) ，與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中馬 伊氏錐蟲(T.evans)的存在與否。
試劑盒組成
| 1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
| 2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
| 3 | 酶標(biāo)包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
| 5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
| 6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
標(biāo)本要求
1 ．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能 馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的 (HRP) 活性。
操作步驟
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照 1 孔 (空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl 。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl ，然后再加待測樣品 10μl 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不 觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl ，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl ，再加入顯色劑 B50μl ，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl ，終止反應(yīng) (此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度 (OD 值) 。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計算和結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20
臨界值 (CUT OFF) 計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0. 15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值 (CUT OFF) 者為伊氏錐蟲(T.evans)陰性 陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值 (CUT OFF) 者為伊氏錐蟲(T.evans)陽性
。
注意事項
1 ．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。
2 ．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3 ．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
4 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5 ．底物請避光保存。
6 ．試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm
7 ．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須 注意安全。
保存條件及有效期
1 ．試劑盒保存：；2-8℃。
2 ．有效期：6 個月
