注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)是第一個(gè)被認(rèn)識(shí)的黃酮類(lèi)化合物合成相關(guān)酶，也是黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。查爾酮異構(gòu)酶和查爾酮合酶一起構(gòu)成了黃酮類(lèi)化合物生物合成的限速酶。
測(cè)定原理：
查爾酮異構(gòu)酶（CHI）催化查爾酮環(huán)化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮，通過(guò)測(cè)定381nm下的吸光度變化表示CHI的活性。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；用時(shí)加入50mL試劑一充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存。
粗酶液提�。�
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至381nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測(cè)定表
在1mL玻璃比色皿中加入50µL上清和950µL試劑二，立即混勻并記錄381nm下初始吸光值A1和37℃保溫30min后的吸光值A2。計(jì)算ΔA＝A2-A1。
CHI活性計(jì)算：
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每小時(shí)A381變化0.1為一個(gè)酶活力單位。
CHI（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.1÷T =400×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每小時(shí)A381變化0.1為一個(gè)酶活力單位。
CHI（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.1÷T =400×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1mL； V樣：加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量。
