注 意：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
PPO（EC1.10.3.1）主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。
測定原理：
PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌，后者在525nm有特征光吸收。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體，60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體，40mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體，10mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）或果汁樣本的處理：
按照血清（漿）或果汁體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）或果汁加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至525nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測定（在EP管中依次加入下列試劑）
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
| 樣本 | 180 |
|
| 煮沸的樣本 |
| 180 |
| 試劑一 | 720 | 720 |
| 試劑二 | 180 |
|
| 蒸餾水 |
| 180 |
37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃（其它物種）中準(zhǔn)確水浴10min后，95℃水浴5min
充分混勻，10000g，25℃離心10min，取上清，525nm處檢測測定管和對照管吸光度。ΔA=A測定管-A對照管。
注意：煮沸樣本的操作：取300μL離心上清于EP管中，進(jìn)行5min 95℃水浴處理；每個(gè)測定管需要設(shè)一個(gè)對照管，可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行5min 95℃水浴處理。
