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尿素氮(BUN)試劑盒

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     意: 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物,在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一。


測(cè)定原理

樣本中尿素氮在氯化高鐵一磷酸溶液中與二乙酰一肟和硫胺脲共煮,生成一種紅色的二嗪化合物,其顏色的深淺與尿素氮含量成正比,采用二乙酰一肟法測(cè)定尿素氮含量。


自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。


試劑組成和配制 

試劑一:液體6mL×1瓶,4℃避光保存,

試劑二:液體60mL×1瓶,4℃避光保存。


樣品處理

1. 組織:按照質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,勻漿后于25℃,10000g離心10min,取上清待測(cè)。

2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):蒸餾水體積(mL )為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL蒸餾水),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清或其它液體:直接檢測(cè)。


測(cè)定操作

 

空白管

測(cè)定管

樣品(μL

 

40

H2OμL

40

 

試劑一(μL

100

100   

試劑二(mL

1000

1000

混勻,沸水浴10min,冷卻后,540nm下測(cè)定吸光值。△A=A測(cè)定-A空白。空白管只要做一管。

 

尿素氮含量計(jì)算:

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y =2.048x + 0.0229R2 = 0.9943;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。

1、按照血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算

尿素氮含量(mg/mL)= (A-0.0229)÷2.048=0.4882×(A-0.0229)

2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

尿素氮含量mg/g鮮重)= (A-0.0229)÷2.048×V樣總÷W=0.4882×(A-0.0229)÷W

3、按照蛋白濃度計(jì)算

尿素氮含量(mg/mg prot)= (A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(A-0.0229) ÷Cpr

V樣總:加入提取液體積,1 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。

 

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