植物銨態(tài)氮試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法50管/48樣
注 意： 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素，自然界中的氮素循環(huán)包括許多轉(zhuǎn)化作用�？諝庵械牡�?dú)獗还痰⑸锛爸参锱c微生物的共生體固定成氨態(tài)氮，經(jīng)過(guò)硝化微生物的作用轉(zhuǎn)化成硝態(tài)氮，后者被植物或微生物同化成有機(jī)氮化物，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。
測(cè)定原理
α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱，經(jīng)氧化脫氨變成相應(yīng)的α-酮酸，酮酸進(jìn)一步脫羧變成醛，水合茚三酮?jiǎng)t被還原，在弱酸環(huán)境中，還原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反應(yīng)， 縮合生成藍(lán)紫色物質(zhì)，在580nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1支，4℃避光保存。臨用前加0.5mL蒸餾水充分溶解。
試劑三：液體25mL×1瓶，4℃保存。
樣本處理
按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室溫勻漿后于25℃，12000g離心10min，取上清待測(cè)。
測(cè)定操作表
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| 空白管 | 測(cè)定管 |
| 樣本（μL） |
| 200 |
| 蒸餾水（μL） | 200 |
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| 試劑一（μL） | 300 | 300 |
| 試劑二（μL） | 10 | 10 |
| 充分混勻，沸水浴5min后自然冷卻10min | ||
| 試劑三（μL） | 500 | 500 |
| 充分混勻，于1mL玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定580nm處吸光值A，分別記為A空白管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管-A空白管 | ||
注意：空白管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.1535x-0.0279，R2=0.999NH4+—N含量（μg/g 鮮重）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V反總÷（W×V樣÷V樣總）
= 32.9×（△A+0.0279）÷W
V反總：反應(yīng)總體積，1.01mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.2mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)
1. 提取好的待測(cè)液盡快測(cè)定，低溫保存不得超過(guò)24小時(shí)。
2. 沸水浴時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響。
3. 顯色后20min內(nèi)完成測(cè)定。
4. 最低檢出限為18μg/g。
