| 該Topoisomerase I 來源于牛痘病毒（vaccinia virus），通過基因重組方案制備純化。其能解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)，除此外其能識別并切割雙鏈DNA末端 [5’C(T)CCTT↓]，并且與DNA形成共價連接形成穩(wěn)定復(fù)合物。該共價復(fù)合物遇到DNA的5’-OH基團(tuán)后，重新連接形成完整DNA鏈。因此，使用Topoisomerase I 酶可作為DNA的連接有效工具。其可用于DNA的載體連接、缺刻修復(fù)、接頭連接等實(shí)驗(yàn)。 | ||||||||
組分 | ||||||||
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應(yīng)用 | ||||||||
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活性定義 | ||||||||
| 1單位指在37℃條件下，1h內(nèi)使1μg超螺旋pUC19 DNA解旋所需要的酶量。 | ||||||||
儲存 | ||||||||
| -20℃可保存3年。 | ||||||||
使用注意事項(xiàng) | ||||||||
| （1）1×vaccinia TOPOI Buffer：50mM Tris-acetate (pH 7.5), 100mM NaCl, 2.5mM MgCl2。 （2）該酶的最佳反應(yīng)溫度為37℃。80℃ 20min可使該酶失活。 （3）該酶切割偶聯(lián)試驗(yàn)時，識別位點(diǎn)[5’C(T)CCTT↓]的3’端堿基數(shù)量影響偶聯(lián)效率。 （4）共價復(fù)合物進(jìn)行DNA分子連接時，底物5’-端需要保留-OH基團(tuán)。 | ||||||||
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