細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。 AnnexinV是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）高親和力特異性結(jié)合。以標(biāo)記了FITC的 AnnexinV作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
Propidium iodide（PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜破裂，因此PI能夠?qū)⒓?xì)胞核染紅。將AnnexinV與PI聯(lián)合使用，可以區(qū)分活細(xì)胞（FITC/PI均為陰性）、凋亡早期 細(xì)胞(FITC陽性、PI均為陰性)、凋亡晚期或死細(xì)胞(FITC/PI均為陽性)。
本細(xì)胞凋亡檢測試劑盒使用改進(jìn)型的高純度FITC染料，其在紅色通道（690nm）無發(fā)射光，因此極大的減少了對紅色通道的干擾。使用該試劑盒進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測時熒光相互干擾更小、檢測更準(zhǔn)確。
組分 | ||||||||||
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應(yīng)用 | ||||||||||
| 細(xì)胞凋亡檢測 | ||||||||||
儲存 | ||||||||||
| 2～8℃，有效期1年。 | ||||||||||
注意事項 | ||||||||||
| 1. 整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作。 2. 反應(yīng)完畢后請盡快檢測，反應(yīng)1 小時后熒光強度就開始衰變。 3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。 4. 試驗操作過程中佩戴手套等防護(hù)用品。 5. 試驗開始前將一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超純水（1:9）稀釋至 1×備用。 | ||||||||||
實例 | ||||||||||
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| 圖：將融合度90%的Hela細(xì)胞分兩組，一組作為對照組正常培養(yǎng)，另一組向培養(yǎng)基中加入終濃度為500μM的H2O2處理1h，后收集細(xì)胞，用細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（HaiGene,S0185）處理后上流式細(xì)胞儀檢測，用Flowjo軟件分析，結(jié)果如圖。注：橫坐標(biāo)為FITC染色，縱坐標(biāo)為PI染色。 | ||||||||||
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