| Hi T7 RNA 聚合酶對T7噬菌體啟動子具有高度的特異性，并可以其作為啟動子，DNA作為模板體外合成正義鏈RNA。線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物雙鏈DNA均可作為T7 RNA 聚合酶的底物模板。Hi T7 RNA聚合酶經(jīng)電子重構(gòu)架及庫篩選，與Wild型相比，該酶的DNA模板結(jié)合區(qū)域親和力更高，使其具有持續(xù)合成能力，從而獲得更高的產(chǎn)量，并易于長片段RNA的合成。 Hi T7高產(chǎn)RNA合成試劑盒是基于Hi T7 RNA聚合酶而組建的試劑盒，20 μl反應(yīng)即可獲得150-200 μg的總產(chǎn)量（產(chǎn)量超過 MegaScript T7 Transcription kit）。利用該高產(chǎn)RNA試劑盒可在體外高效合成多種類型的 RNA，如mRNA、lncRNA、shRNA等。Hi T7 RNA聚合酶識別T7 promoter（TAATACGACTCA CTATA G G）以倒數(shù)第二個G堿基為起點(diǎn)開始轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄長度可達(dá)5000nt以上。利用該試劑盒得到的RNA適用于多種下游應(yīng)用，如RNA結(jié)構(gòu)和功能研究、核酸酶生物化學(xué)研究、RNase保護(hù)分析探針、印跡雜交、反義 RNA 及 RNAi 實(shí)驗(yàn)、微陣列分析、顯微注射、體外翻譯和 RNA 疫苗等。 | ||
應(yīng)用 | ||
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1X T7 Transcription Buffer | ||
| 40 mM Tris (pH 7.8), 10 mM NaCl, 6mM MgCl2,2 mM Spermidine HCl, 10 mM DTT 。 | ||
酶儲存液 | ||
| 10 mM Tris-HCl, 0.1 M NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 0.01% (w/v) Triton X-100 , pH 7.5。 | ||
儲存 | ||
| -20°C可保存2年，避免反復(fù)凍融。 | ||
熱失活 | ||
| 75°C，10min。 | ||
實(shí)例 | ||
| 1.以不同大小的線性化質(zhì)粒作為模板進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄。 | ||
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| 2.以不同大小的PCR產(chǎn)物作為模板進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄 | ||
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