| Golden MLV反轉(zhuǎn)錄酶是海基在鼠源病毒反轉(zhuǎn)錄酶基礎(chǔ)上進(jìn)行改良而得的第四代反轉(zhuǎn)錄酶，通過(guò)定點(diǎn)突變?nèi)コ薘Nase H活性，從而避免反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中降解RNA。同時(shí)經(jīng)過(guò)突變文庫(kù)篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，可耐受55℃高溫反應(yīng)。相比于傳統(tǒng)42℃條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，采用55℃反轉(zhuǎn)錄可更好地打開(kāi)RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而提高復(fù)雜RNA模板的擴(kuò)增性能、提高反轉(zhuǎn)錄cDNA的長(zhǎng)度和產(chǎn)量，因此能更好地提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。 |  | |||||
組分 | ||||||
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單位定義 | ||||||
| 以poly(rA)為模板、oligo(dT)為引物，在37°C條件下，10分鐘內(nèi)催化1 nmol的dTTP摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定義為一個(gè)活性單位。 | ||||||
儲(chǔ)存 | ||||||
| -20°C可保存2年。 | ||||||
反應(yīng)實(shí)例 | ||||||
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| Fig . 應(yīng)用Golden MLV Reverse Transcriptase和T公司MLV 反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄雞肌肉組織和人心臟組織總RNA獲得cDNA，然后分別擴(kuò)增500bp、1642bp和1926bp(79%GC含量)的PCR產(chǎn)物。M:DNA Marker 2000 (HaiGene, A0701)，泳道1、2、3分別為T(mén)公司MLV反轉(zhuǎn)錄酶42°C、Golden MLV反轉(zhuǎn)錄酶42°C和Golden MLV反轉(zhuǎn)錄酶55°C。 | ||||||
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