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cDNA第一鏈反轉錄試劑盒采用穩(wěn)定高效的反轉錄預混體系5×Golden RT MasterMix進行RNA的反轉錄反應,使用時只需加入模板、引物和RNase Free H2O 即可,大大簡化了操作過程、提高了效率、減少了操作過程中的人為誤差。MasterMix中添加了HL dsDNase(熱敏雙鏈特異性核酸酶),該雙鏈特異性核酸酶(又名gDNA Remover)可在反轉錄的過程中,直接降解去除RNA中殘留的基因組DNA污染(可去除100ng基因組DNA),從而在定量PCR的檢測中無需考慮基因組污染的干擾,設計的定量PCR引物也無需進行橫跨外顯子。該試劑盒尤其適用于定量PCR檢測。
該預混體系包含點突變致RNase H活性缺失的Golden MLV Reverse Transcriptase反轉錄酶、dNTP、反應Buffer、gDNA去除試劑和RNase Inhibitor。該試劑盒采用的反轉錄酶去除了RNase H活性,從而避免反轉錄過程中降解RNA。同時經(jīng)過突變文庫篩選,使得其熱穩(wěn)定性更強,可耐受55℃高溫反應。相比于低溫條件下反轉錄反應,采用高溫反轉錄可顯著打開RNA二級結構,從而提高復雜RNA模板的擴增性能、提高反轉錄cDNA的長度和產(chǎn)量,從而提高后續(xù)檢測的靈敏度。合成的第一鏈cDNA可廣泛用于2nd Strand的合成、雜交、PCR擴增、Real-Time PCR反應等。

組分

組分名稱 數(shù)量
5XGolden RT MasterMix (with dsDNase) 400 μl
20XOligo dT(25)&Random Primer 100 μl
Rnase Free H2O 1 ml×2
注:1.該制品可有效反轉錄mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA。
  2. 該制品不可反轉錄microRNA、病毒DNA/RNA樣品。

主要特征

  • dsDNase有效去除基因組的污染,抑制了因基因組污染引起的非特異性擴增
  • 55℃進行反轉錄的MLV反轉錄酶,能更好的轉錄含有復雜高級結構的RNA模板
  • 高效便捷的反轉錄預混體系
  • 反轉錄引物為Random Primer和Oligo dT Primer預混的RT Primer Mix,可更好的合成樣品中的各種cDNA
一步法cdna反轉錄試劑盒

儲存

請置于-20°C,可保存2年;避免反復凍融。注:如5×Golden RT MasterMix(with dsDNase)出現(xiàn)沉淀屬正,F(xiàn)象,可用手捂化,混合均勻后使用不影響實驗結果。
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