Taq DNA 連接酶是一種熱穩(wěn)定性連接酶,能夠催化磷酸二酯鍵的形成,使與同一互補(bǔ)靶 DNA 鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的 5´-磷酸末端和 3´-羥基末端通過磷酸二酯鍵相連。Taq DNA 連接酶催化的連接反應(yīng)只有當(dāng)兩條寡核苷酸鏈與互補(bǔ)靶 DNA 完全配對,并且兩條寡核苷酸鏈之間沒有空隙的條件下才可發(fā)生。因此,可以用它來檢測單堿基替換。在 45℃-65℃ 范圍內(nèi),Taq DNA 連接酶均有活性。 | ||||||
組分 | ||||||
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應(yīng)用 | ||||||
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活性定義 | ||||||
1 單位指 50μl 反應(yīng)體系中,45℃ 條件下,15 分鐘內(nèi)能使 50% 的1μg 經(jīng) BstEII 消化的 λDNA 片段(12 bp 粘性末端)發(fā)生連接所需要的酶量。 | ||||||
儲存 | ||||||
-20℃可保存半年,長期儲存請置于 -70℃。 | ||||||
1× Taq DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液 | ||||||
20 mM Tris-HCl(pH 7.6),25 mM KAc,10 mM Mg(Ac)2,10 mM DTT,1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100,45℃ 溫育。 該酶需 NAD+ 作輔因子,在 10× Taq DNA 連接酶緩沖液中已添加 NAD+;為了延長 NAD+ 的半衰期,緩沖液應(yīng)于 -70℃ 貯存。 |
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