| BL21(DE3)Chaprone感受態(tài)細(xì)胞中含有分子伴侶蛋白質(zhì)粒，其表達產(chǎn)物可協(xié)助重組蛋白正確折疊形成可溶活性蛋白。分子伴侶蛋白質(zhì)粒為氯霉素抗性（chloramphenicol，Cmr）的表達受控于四環(huán)素（tetR）操縱子，因此該感受態(tài)不適用于氯霉素抗性表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。 本BL21(DE3)Chaprone感受態(tài)細(xì)胞使用HaiGene獨有的化學(xué)感受態(tài)專利技術(shù)制備，其室溫可保存3天、-20°C可保存2年（推薦保存溫度）、-80°C可長期保存性能無下降。運輸過程中無需干冰，可室溫運輸、可常規(guī)冰袋運輸（推薦運輸溫度）。該感受態(tài)細(xì)胞為熱激感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)用于蛋白表達（不可用于克隆和載體構(gòu)建），經(jīng)42°C熱激1min可獲得105～106cfu/μg效價，可滿足質(zhì)粒轉(zhuǎn)化要求。該制品使用簡單、運輸、儲存方便。 | ||||||||
組分 | ||||||||
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儲存 | ||||||||
| RTS系列感受態(tài)為干粉形式，均可室溫保存3天，長期保存-20°C（2年）。經(jīng)Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受態(tài)必須分裝后，并于-60°C以下保存。溶解后的感受態(tài)細(xì)胞避免反復(fù)凍融，在-60°C以下可保存6個月。 | ||||||||
使用方法 | ||||||||
| 1. 從-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent徹底融化，放置于冰上。取300 μl Nano E.coli Transfection Reagent加入到一支凍干感受態(tài)細(xì)胞中，并分裝到10支1.5 ml EP管中（每支30 μl），于-60°C以下保存（或立即使用）。 2. 將10～100 ng質(zhì)粒DNA（不可使用連接產(chǎn)物、不可使用氯霉素篩選標(biāo)記質(zhì)粒）加入到分裝的感受態(tài)細(xì)胞中，輕彈EP管（或槍頭輕輕吹打），置于冰上15min。 3. 置于42°C熱激1 min后，迅速置于冰上急冷2 min。 4. 熱激完畢后，向上述感受態(tài)細(xì)胞中加入450 μL不含抗生素的SOC（或LB）培養(yǎng)基，37°C振蕩（225 rpm）培養(yǎng)60 min。使質(zhì)粒上抗性標(biāo)記基因表達，菌體復(fù)蘇。 5. 取200 μl復(fù)蘇菌液涂布到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板表面。（含相應(yīng)質(zhì)�？股睾�20 μg/ml氯霉素） 6. 將平板置于37 °C培養(yǎng)，12~18小時后可出現(xiàn)菌落。 7. 挑選生長良好的菌落，接入LB培養(yǎng)基（含相應(yīng)質(zhì)�？股兀�20 μg/ml氯霉素），37℃劇烈振蕩培養(yǎng)過夜。 8. 1/50比例接入新的LB培養(yǎng)基（含相應(yīng)質(zhì)�？股�，20 μg/ml氯霉素，0.5 mg/ml L-阿拉伯糖）37 ℃劇烈振蕩培養(yǎng)至菌體密度OD600約0.3（約2h）。 9. 加入終濃度2 ng/ml四環(huán)素（誘導(dǎo)chaprone伴侶蛋白表達），37℃劇烈振蕩培養(yǎng)至OD600約0.5（約2~4h）。 10. 加入適量IPTG(0.1-1 mM), 15℃振蕩培養(yǎng)24h（培養(yǎng)搖床無法制冷條件下，室溫誘導(dǎo)8～12h）。 11. 4,000 rpm室溫離心15 min，收集細(xì)胞，進行蛋白表達和可溶性表達分析。 | ||||||||
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