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RTS BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

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RTS(Room Temperature Stable)系列感受態(tài)細(xì)胞為獨(dú)有的化學(xué)感受態(tài)專利技術(shù)制備,其室溫可保存3天、-20°C可保存2年(推薦保存溫度)、-80°C可長(zhǎng)期保存性能無(wú)下降。運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需干冰,可常規(guī)冰袋運(yùn)輸(推薦運(yùn)輸溫度)。RTS表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞均為熱激感受態(tài)細(xì)胞,轉(zhuǎn)用于蛋白表達(dá)(不可用于克隆和載體構(gòu)建),經(jīng)42°C熱激1min可獲得105~106cfu/μg效價(jià),可滿足質(zhì)粒轉(zhuǎn)化要求。該制品使用簡(jiǎn)單、運(yùn)輸、儲(chǔ)存方便。

組分

組分名稱 數(shù)量
RTS Competent Cell(10T) 1瓶
Nano E.coli Transfection Reagent 1 ml

儲(chǔ)存

RTS系列感受態(tài)為干粉形式,均可室溫保存3天,長(zhǎng)期保存-20°C(2年)。經(jīng)Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受態(tài)必須分裝后,并于-60°C以下保存。溶解后的感受態(tài)細(xì)胞避免反復(fù)凍融,在-60°C以下可保存6個(gè)月。

使用方法

1. 從-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent徹底融化,放置于冰上。
注意:該試劑含長(zhǎng)鏈帶電化合物,允許反復(fù)凍融20次,使用完畢后繼續(xù)-20°C保存。
2. 取50 μl Nano E.coli Transfection Reagent置于0.2 ml EP管中,加入10~100 ng質(zhì)粒DNA(不可使用連接產(chǎn)物),槍頭吹打混合均勻,冰上放置2min。
注意:放置時(shí)間不要超過(guò)30min,過(guò)長(zhǎng)時(shí)間會(huì)導(dǎo)致核酸聚合,從而影響轉(zhuǎn)化效價(jià)。
3. 將上述混合物(50 μl Nano E.coli Transfection Reagent和質(zhì)粒DNA)加入到一支RTS表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞干粉中,槍頭輕輕吹打,徹底溶解細(xì)胞干粉,置于冰上15min。
注意:使用RTS 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞干粉前,輕甩干粉至管底部,如果發(fā)現(xiàn)干粉已經(jīng)溶解則不可使用。
4. 置于42°C熱激1min后,迅速置于冰上急冷2min。
5. 將熱激完畢的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有450 μl不含抗生素的SOC(或LB)培養(yǎng)基,37°C振蕩(225 rpm)培養(yǎng)60min。使質(zhì)粒上抗性標(biāo)記基因表達(dá),菌體復(fù)蘇。
6. 取200 μl復(fù)蘇菌液涂布到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板表面。
7. 將平板置于37°C培養(yǎng),12~18小時(shí)后可出現(xiàn)菌落。
8. 獲得的表達(dá)菌,可使用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),從而獲得重組蛋白。

 
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