| 核酸外切酶 III來(lái)源于E.coli，具有3'-5'外切酶活性，它作用于雙鏈 DNA，從 3' OH 末端方向逐步切去單核苷酸；每次酶與底物結(jié)合催化，只有幾個(gè)核苷酸被除掉，從而在 DNA 分子群內(nèi)產(chǎn)生漸進(jìn)缺失。該酶的最佳底物為平末端、5'突出末端雙鏈DNA分子，但也可作用于雙鏈DNA的缺刻處，從3'降解DNA分子，釋放5'單核苷酸。對(duì)于3'突出末端，尤其是多于4nt的幾乎完全不切割, 亦不能切割硫代磷酰脂鍵。核酸外切酶 III 的活性部分依賴(lài)螺旋結(jié)構(gòu)，并根據(jù)序列的不同而有差異（C＞A=T＞G）。另外，核酸外切酶 III還具有脫嘌呤/嘧啶-核酸內(nèi)切酶活性、RnaseH活性和3' 磷酸酶活性。 | ||||||||
組分 | ||||||||
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應(yīng)用 | ||||||||
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單位定義 | ||||||||
| 50 μl 反應(yīng)體系中，37℃ 條件下，30 分鐘 催化E.coli DNA 產(chǎn)生 1 nmol 酸可溶性產(chǎn)物所需要的 量定義為一個(gè)活性單位。 | ||||||||
1X Exonuclease III Buffer | ||||||||
| 10 mM Bis-Tris（pH 7.0），10 mM MgCl2，1 mM DTT。 | ||||||||
熱失活 | ||||||||
| 70°C 20min。 | ||||||||
儲(chǔ)存 | ||||||||
| 置于-20°C，可保存3年。 | ||||||||
實(shí)例 | ||||||||
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| Fig 1:分別用不同的內(nèi)切酶切質(zhì)粒DNA產(chǎn)生5'突出末端、平末端和3'突出末端產(chǎn)物，然后用Exonuclease III（2.5U）分別酶切這三種產(chǎn)物（5 μg），將酶切產(chǎn)物瓊脂糖電泳。泳道1：5'突出末端產(chǎn)物；泳道2：平末端產(chǎn)物；泳道3：3'突出末端產(chǎn)物；M：DNA Marker 10000。 | ? | Fig 2:EcoR V酶切pUC57質(zhì)粒獲得酶切產(chǎn)物，然后分別用不同量的Exonuclease III酶切該產(chǎn)物獲得漸進(jìn)缺失產(chǎn)物。泳道1：對(duì)照（不加Exonuclease III); 泳道2：0.312U Exonuclease III; 泳道3：0.625U Exonuclease III; 泳道4：1.25U Exonuclease III; 泳道5：2.5UExonuclease III; M：DNA Marker 10000。 | ||||||
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