HPV假病毒說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：HPV假病毒
【包裝規(guī)格】
15μl /30μl /50μl /100μl/管
【預(yù)期用途】
用于HPV抗血清或者單抗中和抗體滴度體外檢測。
【檢驗原理】
中和抗體在體外與假病毒中和，使得部分假病毒喪失感染細(xì)胞的能力，進入細(xì)胞的假病毒會表達(dá)eGFP、RFP和E2-Crimson等熒光報告基因蛋白。通過Elispot讀板儀掃描并計數(shù)每孔的熒光斑點數(shù)，將待測樣品孔的熒光斑點數(shù)與假病毒對照組的熒光斑點數(shù)進行比較，可計算待測樣品的抑制百分比。通過計算公式可以計算出當(dāng)50%假病毒被抑制時抗體的稀釋倍數(shù)，即ID50（Inhibition dilution），用ID50來表示抗體對假病毒的中和活性。ID50值越大，抗體中和活性越高。
【主要組成成分】
HPV假病毒顆粒，L1蛋白，報告基因
【儲存條件及有效期】
-80℃ 密封貯存。有效期：長期。
避免反復(fù)凍融。
生產(chǎn)日期及有效期詳見標(biāo)簽。
【樣本要求】
樣本為HPV假病毒，需在無菌條件下操作。
【使用方法】
1. 提前預(yù)鋪細(xì)胞：中和實驗所用細(xì)胞為HEK 293FT細(xì)胞（暫無其他推薦的替代細(xì)胞），提前2-6小時將HEK 293FT細(xì)胞消化，并加入96孔透明平底無菌細(xì)胞培養(yǎng)板中。
2. 待測樣品系列稀釋：在96孔無菌細(xì)胞培養(yǎng)板中，將待測樣品進行系列稀釋。
3. 病毒稀釋：本產(chǎn)品為假病毒母液，客戶依據(jù)報告中假病毒的滴度進行稀釋使用（1TCID50=1熒光斑點）。
4. 待測樣品與病毒混合孵育：將系列稀釋后的待測樣品與稀釋后的假病毒溶液混合，4℃條件下孵育1小時。
5. 孵育結(jié)束后，將上述混合液與提前預(yù)鋪的細(xì)胞進行混合。
6. 將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃、5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)60-96小時。
7. 使用ELISPOT熒光斑點計數(shù)儀進行檢測，計算感染抑制率（%）。
感染抑制率（%）=1-（樣本檢測值-細(xì)胞對照值）/（病毒對照值-細(xì)胞對照值）×100%。
8. 客戶根據(jù)自定標(biāo)準(zhǔn)進行ID50計算（推薦使用Reed-Muench法）。
建議的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板布局圖
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| A | | |
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| B | | 細(xì)胞對照（僅含有細(xì)胞） | 病毒對照（假病毒+細(xì)胞） |
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【陽性判斷值】
1. 中和實驗過程中必須設(shè)置細(xì)胞對照和病毒對照（見上，建議的布局圖）。
2. 中和實驗過程中需要設(shè)置陰性內(nèi)控品及陽性內(nèi)控品（客戶自備）來判斷實驗是否成立。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
外觀 外觀應(yīng)滿足如下要求：包裝完整，無破損，文字符號標(biāo)識清晰。
【注意事項】
1. 本產(chǎn)品僅供中和抗體體外檢測使用。
2. 本產(chǎn)品報告提供假病毒滴度。因細(xì)胞水平的中和抗體檢測受細(xì)胞類型、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)、環(huán)境條件等影響較大，客戶需根據(jù)自身實驗室條件確定細(xì)胞量、病毒加入量等中和實驗參數(shù)。
3. 減少反復(fù)凍融，少量使用時建議分裝儲存。
4. 流水或者4℃融化使用。
5. 無菌操作。
6. 本產(chǎn)品不能擴增傳代。
