貨號(hào)：EX1200

規(guī)格：50T/ 100T

有效期：2-8℃保存，有效期一年

產(chǎn)品內(nèi)容：

1.    蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。注：

2.    蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成 液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3.    試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

全血蛋白提取試劑盒適用于從各種動(dòng)物抗凝/非抗凝全血樣品中提取總蛋白。

本試劑盒含有的獨(dú)特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本 試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、 Gel shift  凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA ，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳。也可以將最后樣品用脫 鹽柱脫鹽處理后再用于2D電泳。

自備試劑和儀器

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸 頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1 、使用方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘。

2 、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3 、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4 、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú) 立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成 使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白 酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開 蓋時(shí)試劑損失。

3. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸 酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

10.      Western Blot實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用beta-actin 、GAPDH 、Tubulin。

二、操作步驟

1.  提取液準(zhǔn)備：

每500μl冷的總蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。 【注】：

  根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。   加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

  蛋白樣品用于測(cè)定某些細(xì)胞內(nèi)蛋白酶、磷酸酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整抑制

劑混合物是否加入。

  以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2 ．取 300μl 全血樣本，加入 300μl 蛋白提取液，充分混勻后，在 4℃條件下振蕩 20-40 分鐘。 【注】：

  使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

  沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻

即可。

3.  在 4℃ ，14000×g  條件下離心 10 分鐘。

4.  將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到全血蛋白。

【注】：

  一般沉淀只是離心管底部薄薄一層。沒有明顯團(tuán)塊。

  整個(gè)紅色液體即是全血蛋白上清液。

5.  將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。 【注】：

  建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

  蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。   全血樣品蛋白濃度較高，需要稀釋后用于下游實(shí)驗(yàn)。