【預(yù)期用途】
用于HPV抗血清或者單抗中和抗體滴度體外檢測(cè)。
【檢驗(yàn)原理】
中和抗體在體外與假病毒中和，使得假病毒喪失感染細(xì)胞的能力，進(jìn)入細(xì)胞的假病毒會(huì)表達(dá)EGFP等蛋白，通過Elispot讀板儀掃描并計(jì)數(shù)每孔熒光斑點(diǎn)數(shù)，通過與假病毒對(duì)照組熒光斑點(diǎn)數(shù)比較，計(jì)算其抑制百分比，通過計(jì)算公式可以計(jì)算出當(dāng)假病毒50%被抑制時(shí)抗體的稀釋倍數(shù)，來計(jì)算其ID50,用ID50來表示抗體對(duì)假病毒中和活性大小。
【主要組成成分】
HPV假病毒顆粒，L1和L2蛋白以及報(bào)告基因，自折疊成HPV假病毒顆粒
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-80℃ 密封貯存。有效期：長期。
避免反復(fù)凍融。
生產(chǎn)日期及有效期詳見標(biāo)簽。
【樣本要求】
樣本為HPV假病毒，可在體內(nèi)復(fù)制一輪，操作時(shí)需在無菌條件下操作。
【檢驗(yàn)方法】
1 預(yù)先4-8小時(shí)鋪293FT細(xì)胞于96孔板，每孔細(xì)胞數(shù)為1.5×104 ，置于37℃、 5% CO2孵箱中培養(yǎng)。
2 加樣順序
2.1 40倍初始稀釋：取96孔U型板，于B4- B11孔中各加入152μl DMEM完全培養(yǎng)基，其余各孔中加入120μl DMEM完全培養(yǎng)基。于B4- B11孔中加入血清樣品8μl/孔，每樣品兩復(fù)孔。
2.2 10倍初始稀釋：取96孔U型板，于B4- B11孔中各加入128μl DMEM完全培養(yǎng)基，其余各孔中加入120μl DMEM完全培養(yǎng)基。于B4- B11孔中加入血清樣品32μl/孔，每樣品兩復(fù)孔。
3樣品稀釋：將多道電動(dòng)移液器調(diào)至40μl移液和100μl混勻程序，對(duì)B4- B11孔中液體輕柔的反復(fù)吹吸8次充分混勻，然后轉(zhuǎn)移40μl液體至對(duì)應(yīng)的C4- C11孔，輕柔的反復(fù)吹吸8次后轉(zhuǎn)移至D4-D11孔，以此類推，最后從G4-G11孔中吸棄40μl液體。
5.2.4 用DMEM完全培養(yǎng)基將假病毒稀釋至200TCID50，于第B3-G11孔，每孔加120μl。
5.2.5將稀釋板4℃ 放至1小時(shí)。
5.2.6 從稀釋板各孔中吸取100μl的假病毒血清混合物（或培養(yǎng)基）貼壁緩緩加入預(yù)先已鋪好細(xì)胞的培養(yǎng)板對(duì)應(yīng)孔中，輕拍培養(yǎng)板四周混勻。
5.2.7 將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃、5% CO2的孵箱中培養(yǎng)60-96小時(shí)。
5.2.8 ELISPOT讀板儀進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算感染抑制率（%）=1-（樣本檢測(cè)值-細(xì)胞對(duì)照值）/（病毒對(duì)照值-細(xì)胞對(duì)照值）×100%。
5.2.9 計(jì)算ID50。
【陽性判斷值】
中和實(shí)驗(yàn)過程中需要設(shè)置陰性對(duì)照，陽性對(duì)照，作為參照，來判斷實(shí)驗(yàn)是否成立，陰性對(duì)照ID50小于30，陽性ID50大于30作為判斷值
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1. 外觀
外觀應(yīng)滿足如下要求：
1.1包裝完整，無破損；外觀應(yīng)整潔，文字符號(hào)標(biāo)識(shí)清晰；
【注意事項(xiàng)】
1.本產(chǎn)品僅供中和抗體體外檢測(cè)。
2.減少反復(fù)凍融
3.流水或者4℃融化使用。
4.無菌操作。
本產(chǎn)品不能重復(fù)使用
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