維生素C 檢測試劑盒(磷鉬酸微板法)
產(chǎn)品簡介：
維生素 C(Vitamin C)又稱 L-抗壞血酸，是高等靈長類動物與其他少數(shù)生物的必需營養(yǎng)素，在生物體內(nèi)維生素 C 是一種抗氧化劑，為酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸內(nèi)酯，保護(hù)身體免于自由基的威脅，同時也是一種輔酶，其廣泛的食物來源為各類新鮮蔬果。Vc 有 L-型和 D-型兩種異構(gòu)體，只有 L-型的才具有生理功能，還原型和氧化型都有生理活性。
維生素 C 檢測試劑盒(磷鉬酸微板法)檢測原理是在強酸和偏磷酸根離子存在條件下，鉬酸銨能與還原型維生素 C 反應(yīng)生成藍(lán)色化合物，在一定濃度范圍吸光度值與濃度呈線性關(guān)系，以酶標(biāo)儀 760nm 處檢測吸光度，獲得 Vitamin C 含量。該試劑盒主要用于植物組織中的還原型維生素 C(抗壞血酸)的檢測，其優(yōu)點是：1、反應(yīng)迅速；2、操作簡便； 3、還原糖及其他常見的還原物質(zhì)對實驗沒有干擾，專一性好。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
| 編號 名稱 | L2031 100T | Storage | |
| 試劑(A): Vitamin C 標(biāo)準(zhǔn)(250μg/ml) | 1ml | 4℃ 避光 | |
| 試劑(B): 組 織勻漿液 | 試劑(B1): 組織勻漿液 A | 100ml | RT |
| 試劑(B2): 組織勻漿液 B | 12ml | RT | |
| 試劑(C): MPA | 0.2g | RT | |
| 試劑(D): 酸性緩沖液Ⅰ | 5ml | RT | |
| 試劑(E): 酸性緩沖液Ⅱ | 10ml | RT | |
| 試劑(F): 鉬酸銨 | 0.5g | RT | |
| 使用說明書 | 1 份 | ||
自備材料：
1、蒸餾水
2、電子天平、研磨器或勻漿器
3、離心機、離心管或試管
4、水浴鍋或恒溫箱
5、酶標(biāo)儀、96 孔板
操作步驟(僅供參考)：
1、配制組織勻漿液：按組織勻漿液 A:組織勻漿液 B:蒸餾水=8:1:91 的比例混勻即得。
2、準(zhǔn)備樣品：取待測材料如青菜、水果、松針等，清洗擦干，準(zhǔn)確稱量 1g，加入研磨器內(nèi)，再加入少量組織勻漿液，研磨碎，留取上清，再次用組織勻漿液研磨，最后一并倒入 10ml 離心管，補充組織勻漿液至 10ml，充分混勻，4000r/min 離心
5min，取 0.05ml上清液，加入等量蒸餾水，即為待測液。
3、配制 MPA 工作液：稱取 0.3g MPA 粉末，充分溶解于 10ml 酸性緩沖液Ⅰ中，也可根據(jù)使用情況稱取一定量的 MPA 按比例溶解即可，4℃保存 3~4 天有效。
4、配制 Vitamin C Assay buffer：取鉬酸銨粉末 0.5g，充分溶解于 10ml 蒸餾水中，也可根據(jù)使用情況稱取一定量的鉬酸銨加水按比例溶解即可，4℃避光保存。注意：鉬酸銨溶于水會逐漸變化成乳白色濁液，則不能使用。
5、配制系列 Vitamin C 標(biāo)準(zhǔn)：取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行操作，依次稀釋。
| 加入物(μl ) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| Vitamin C 標(biāo)準(zhǔn)(250μg/ml) | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 80 | 100 |
| 蒸餾水 | 80 | 70 | 60 | 50 | 40 | 20 | 0 |
| 相當(dāng)于 Vitamin C 濃度(μg/ml) | 50 | 75 | 100 | 125 | 150 | 200 | 250 |
6、Vitamin C 加樣：按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的 Vitamin C 含量過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置 2 平行孔，求平均值。
| 加入物(μl) | 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測定孔 |
| 蒸餾水 | 40 | － | － |
| 系列 Vitamin C 標(biāo)準(zhǔn)(1~7 號) | － | 40 | － |
| 待測液 | － | － | 40 |
| 1×組織勻漿液 | 80 | 80 | 80 |
| MPA 工作液 | 20 | 20 | 20 |
| 酸性緩沖液Ⅱ | 40 | 40 | 40 |
| Vitamin C Assay buffer | 80 | 80 | 80 |
7、Vitamin C 測定：立即混勻，30℃水浴 20min，空白調(diào)零，以酶標(biāo)儀測定 760nm 處系列標(biāo)準(zhǔn)孔、測定孔的吸光度。
計算：以系列標(biāo)準(zhǔn) Vitamin C (50、75、100、125、150、200、250μg/ml)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程，以測定孔的吸光度代入回歸方程求得樣品維生素 C 含量。
100g 樣品中維生素 C 含量(mg)
=(c0×V1)×100/(m1×1000)=(c0×V1) /(m1×10)
式中：c0 :待測樣品的吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的維生素 C 的濃度(μg/ml)
V1 : 待測液的總體積(ml) m1 : 樣品質(zhì)量(g)
1000 : μg 換算成 mg
注意事項：
1、 Vitamin C 標(biāo)準(zhǔn)避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。
2、 組織勻漿液 A 保存溫度過低時易產(chǎn)生結(jié)晶，可用溫水浴溶解后再使用。
3、 Vitamin C Assay buffer 室溫保存時間過長或者過期會出現(xiàn)白色粘稠物，不可使用，應(yīng)換新的產(chǎn)品使用。不使用時建議 4℃保存。
4、 待測樣品如不能及時測定，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定。
5、 如果樣品濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
有效期： 6 個月有效。4℃運輸，4℃保存。
附錄 1：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作： 在室溫條件下按說明書操作，用分光光度計對系列標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行吸光度的測定，其標(biāo)準(zhǔn)曲線如下(僅供參考)
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