產(chǎn)品簡介
本試劑盒提供特殊的組份可提取細胞及組織中的膜蛋白，提取Buffer采用特殊配方在裂解細胞的同時可以選擇性地分離提取細胞膜蛋白和細胞器膜蛋白。提取方法簡單、可靠、快速同時獲得的膜蛋白純度高，可用于SDS-PAGE、Western Blot、免疫共沉淀或細胞信號傳導(dǎo)等后續(xù)研究，每次可以提取107個培養(yǎng)細胞或200 mg動物組織。
本試劑盒可以使用50次。
產(chǎn)品特點
1. 整個操作過程只需要60 min左右。
2. 即可以用于培養(yǎng)細胞（50X 107個）又可以用于動物組織（50X 200 mg）蛋白質(zhì)的提取。
3. 避免蛋白酶對蛋白質(zhì)的降解，保持膜蛋白質(zhì)的完整性和天然活性。
4. 提取的膜蛋白純度高，不需要超速度離心，可以同時處理多個樣品。
運輸和保存條件
在常溫下運輸，收到后將蛋白酶抑制劑、1X Loading Buffer、DTT置于-20°C的環(huán)境中保存，其余組分置于4°C保存，保質(zhì)期兩年。
操作步驟
1. 對于懸浮培養(yǎng)或用細胞刮刮下的貼壁培養(yǎng)細胞，離心收集不少于1X 107細胞，再用預(yù)冷的雙蒸水稀釋至一倍濃度的洗滌液洗滌細胞三次，每次3000 rpm離心5 min。
2. 對于組織樣本（200 mg）盡量去除脂肪組織和結(jié)締組織等非目的組織，冰上剪碎，再用預(yù)冷雙蒸水稀釋至一倍濃度的洗滌液洗滌細胞三次。
3. 在上述細胞或組織樣本中加入1 mL提取Buffer（使用前，每mL提取Buffer中加入1 μl蛋白酶抑制劑和1 μl DTT），將組織在4°C環(huán)境下置于預(yù)冷的玻璃勻漿器中，手動勻漿30~50次，勻質(zhì)勻漿至沒有明顯的組織小塊�；�?qū)⒓毎暺扑椋?/span>次30 sec，3~4次，每次間隔1 min，置于冰上冷卻，超聲破碎細胞后應(yīng)鏡檢，細胞破碎率不小于90％。
4. 裝入1.5 mL的預(yù)冷的離心管中，冰上放置10 min左右，期間取出劇烈振蕩2~3次，于4°C，14000 rpm離心10 min，棄沉淀，上清轉(zhuǎn)至新管中。
5. 上清置于37°C水浴10 min。再室溫，14000 rpm離心5~20 min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）
6. 取下層，加入500 μl冰冷滅菌水，4°C放置5 min，再置于37°C水浴10 min。
7. 室溫，14000 rpm離心5~10 min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）。
8. 取下層，加入500 μl冰冷滅菌水，4°C放置5 min，再置于37°C水浴10 min。
9. 室溫，14000 rpm離心5~10 min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）。
10. 最終得到的下層即為膜蛋白提取物，冷凍保存。
