一、細胞培養(yǎng)條件
產(chǎn)品名稱 | 豬巨噬細胞 | 英文名稱 | ZMAC-4 |
生長特性 | 貼壁生長 | 凍存條件 | 無血清凍存液 |
培養(yǎng)體系 | 專用培養(yǎng)基 | ||
傳代方法 | 1:3傳代;2~3天1次。 | 傳代情況 | 2天換液 |
備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過渡培養(yǎng) |
T25 細胞到貨處理
觀察:
1 、收到細胞后,請及時核對培養(yǎng)瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養(yǎng) 瓶是否有破損或漏液等異常情況。
處理:
1 、75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部。
2 、顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存 (40x, 100x,200x 各一張) 前 三天照片為重要售后依據(jù),不提供照片默認收到狀態(tài)良好。
3 、不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理,以穩(wěn)定細胞狀 態(tài)。
4 、收到細胞后,及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態(tài),并按常規(guī)貼壁或懸浮細胞 的傳代方法操作。
貼壁:未超過 80%匯合度時,將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,留 5ml 完全培養(yǎng)基, 放入 37℃ 、5%CO2 孵箱培養(yǎng);超過 80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細胞 培養(yǎng)步驟。首次傳代,建議 1:2 傳代 (兩個 T25) 。(傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng) 基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基,進行對比培養(yǎng)。)
特殊細胞注意事項:個別細胞貼壁不牢,在運輸過程中發(fā)生細胞脫落,這是正常現(xiàn)象。 請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm 離心 5min,收集上清 (后期對比培養(yǎng)使用), 沉淀加入胰酶 1-2ml ,輕輕吹打,重懸,消化 1-2 分鐘后,加 5ml 完全培養(yǎng)基終止反應。再 離心,棄上清,加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按 1:2 比例進行分瓶傳代 (兩個 T25) ,補充 新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,最后放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(注意:如收到密封培養(yǎng)瓶,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松)
凍存細胞到貨處理
1 、收到細胞后,檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等 問題,請即時聯(lián)系。
2 、將細胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或-80 度冰箱保存,建議盡早復蘇。
3 、復蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系,會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第 二管。特別說明:未與我方聯(lián)系擅自復蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
細胞復蘇
1 、 從液氮中取出細胞凍存管 (注意:佩戴防爆管面具) ,快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2 、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;
3 、棄上清,沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸,接種 T25 培養(yǎng)瓶,于 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中 培養(yǎng);
4 、第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞傳代
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細胞一次:
2 、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后 加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管 中,1000rpm 離心 5min;
3 、棄上清,沉淀細胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進行分瓶傳代 (兩個 T25), 補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,最后放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
細胞凍存
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細胞一次;
2 、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后 加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管 中,1000rpm 離心 5min;
3 、 棄上清,沉淀細胞加入 1ml/支的雅吉無血清凍存液 (7001) ,混勻后加入凍存管中。 (如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液)
4 、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱 存放 24 小時以上。