簡(jiǎn)介：

StemPro-34 SFM 是一種無血清培養(yǎng)基，專門配制用于支持人造血細(xì)胞在培養(yǎng)物中的生長(zhǎng)，包括從骨髓、新生兒臍帶血和外周血中分離的 HSC 和祖細(xì)胞。

StemPro-34 SFM 是一種靈活的細(xì)胞培養(yǎng)基，可用于多種應(yīng)用。

細(xì)胞收到后處理

半貼壁、半懸浮細(xì)胞處理方法：

1、該細(xì)胞是半貼壁半懸浮生長(zhǎng)，懸浮細(xì)胞用離心管收集細(xì)胞懸液，1000rpm 離心 5min，收 集上清（后期對(duì)比培養(yǎng)使用）。

2、當(dāng)未超過 80%匯合度時(shí)，將離心收集到的懸浮細(xì)胞沉淀加入 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，加入 原培養(yǎng)瓶中，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)。

3、超過 80%匯合度時(shí)，將貼壁細(xì)胞根據(jù)貼壁細(xì)胞傳代方法消化、離心、收集；將懸浮細(xì)胞 和貼壁細(xì)胞的沉淀用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸收集到一起，混勻后，按 1:2 進(jìn)行分瓶傳代（2 個(gè) T25）。

（傳代時(shí)建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基， 進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)。）

（注意：如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時(shí)要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松）

凍存細(xì)胞到貨處理

1、收到細(xì)胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等 問題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。

2、將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復(fù)蘇。

3、復(fù)蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時(shí)與我們聯(lián)系，會(huì)有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第 二管。特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。

細(xì)胞復(fù)蘇

1、 從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)；

4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代 1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，收集 T25 培養(yǎng)瓶中的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液，1000rpm 離心 5min；

2、貼壁細(xì)胞用 PBS 清洗一次，添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡 下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)基終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后 將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3、棄上清，將懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的沉淀用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸收集到一起，混勻后， 按 1:2 進(jìn)行分瓶傳代（2 個(gè) T25）。補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

細(xì)胞凍存

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，收集 T25 培養(yǎng)瓶中的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液，1000rpm 離心 5min；

2、用 PBS 清洗細(xì)胞一次，添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀 察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)基終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸 液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3、 棄上清，將懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞沉淀加入 1ml/支的雅吉無血清凍存液（7001），重 懸收集到一起，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）

4、 將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱 存放 24 小時(shí)以上。