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葉綠體提取試劑盒

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儀器準(zhǔn)備
1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS緩沖液 (pH7.4,實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS:約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
使用注意事項(xiàng)
1.離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力(RCF,×g)和每分鐘轉(zhuǎn)速(RPM)兩種表示方式,有些離心機(jī)設(shè)置有RPM和×g顯示切換,但部分離心機(jī)沒有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算:
g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 為有效離心半徑,即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長(zhǎng)度,單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為3000rpm,有效離心半徑為10 cm,則相對(duì)離心力(RCF,×g)為=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
使用方法
1. 取500mg-1g新鮮植物樣本葉片,洗凈擦干后去除葉梗和粗脈。用手術(shù)剪刀盡可能剪碎。
2. 加入2ml PBS用組織攪碎機(jī)/勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。
3. 將勻漿用100 μm細(xì)胞篩過(guò)濾。
4. 將濾液在3000×g條件下離心10分鐘,棄上清,收集沉淀。
5. 在沉淀中加入1ml提取液A,充分混勻。
6. 用勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。
7. 在3000×g條件下離心10分鐘,棄上清,收集沉淀。
8. 在沉淀中加入0.5ml提取液B,充分混勻。
9. 置振蕩器振蕩20分鐘。
10. 在200×g力離心2分鐘。棄沉淀,取上清。
11. 在1000×g力離心2分鐘。棄沉淀,取上清。
12. 將上清3000×g力離心10分鐘。
13. 棄上清,沉淀即為葉綠體。
14. 用400 μl葉綠體懸浮液或其他相應(yīng)的緩沖液重懸葉綠體,置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
 
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