產(chǎn)品簡(jiǎn)介：基底膜是動(dòng)物體內(nèi)上皮細(xì)胞基底面的一層基質(zhì)膜。是從Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤組織提取的基底膜成分，所形成的基質(zhì)膠。該基質(zhì)膠主要成分為laminin，collagen IV，heparan sulfate proteoglycans（Kleinman et al. 1986）。同時(shí)，該基質(zhì)膠也包含多種生長(zhǎng)因子，例如表皮生長(zhǎng)因子EFG，血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF，神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子FGF-2，乙型轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-beta和胰島素樣生長(zhǎng)因子ILGF（Vukicevic et al. 1992）。
產(chǎn)品來(lái)源：
Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤基底膜成分
產(chǎn)品儲(chǔ)存：
建議您融化后先按照單次用量進(jìn)行分裝，保存-20°C冰箱，有效期2年。
產(chǎn)品性質(zhì)：
本品在4°C條件下為液態(tài)，但在加熱到37°C時(shí)呈凝膠狀態(tài)�；|(zhì)膠凝固后，重新放回4°C過(guò)夜，基質(zhì)膠可再次液化。
注意事項(xiàng)：
該基質(zhì)膠在溫度高于10°C時(shí)就會(huì)開(kāi)始凝固成膠，所以盡量在冰上操作基質(zhì)膠。類(lèi)器官傳代時(shí)，如果為了避免酶對(duì)類(lèi)器官造成影響，可直接用4°C預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)基質(zhì)膠進(jìn)行緩慢吹打，即可將類(lèi)器官?gòu)幕|(zhì)膠中釋放出來(lái)。
產(chǎn)品應(yīng)用：
本品適用于類(lèi)器官生長(zhǎng)、分化、代謝和毒理學(xué)研究，體內(nèi)和體外血管生成實(shí)驗(yàn)。
操作方法：
一、腫瘤類(lèi)器官藥敏實(shí)驗(yàn)（操作所需時(shí)間為2小時(shí)）
1.將擴(kuò)增好足夠量的腫瘤類(lèi)器官（實(shí)驗(yàn)組）以及正常類(lèi)器官（對(duì)照組）用4°C預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行重懸，緩慢機(jī)械吹打，促進(jìn)膠液化溶解，并保持類(lèi)器官結(jié)構(gòu)完整（可用于懸浮培養(yǎng)于有5%基質(zhì)膠溶液的基質(zhì)膠表面）（Guillen et al. 2022）�；蛘咄ㄟ^(guò)TryplE酶消化獲得單細(xì)胞懸液。
2.離心收集類(lèi)器官細(xì)胞，并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
3.加入LYN基質(zhì)膠原液，與細(xì)胞進(jìn)行混勻。
4.將細(xì)胞與膠的混合物，通過(guò)排槍加入37°C預(yù)熱過(guò)的96孔板，或者384孔板，立即將孔板放入培養(yǎng)箱。
5.大約10min后，基質(zhì)膠將凝固，加入相應(yīng)體積的類(lèi)器官培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。
6.類(lèi)器官形成后（如果是機(jī)械吹打，類(lèi)器官將在傳代24h后就會(huì)形成；如果是酶消化，類(lèi)器官會(huì)在3-5天后形成），每個(gè)孔分別加入含有PI染料以及不同種類(lèi)、不同濃度的待篩選的抗腫瘤藥物。
7.用高內(nèi)涵顯微鏡上進(jìn)行活細(xì)胞成像，測(cè)定腫瘤類(lèi)器官對(duì)各種藥物的敏感性。
二、血管生成實(shí)驗(yàn)（以永生化HUVEC細(xì)胞系為例，操作所需時(shí)間為1小時(shí)）
1.將完全培養(yǎng)基換成饑餓細(xì)胞用培養(yǎng)基：加入含0.2% FBS，2mM L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸鈉，100U/ml青霉素和100µg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)。
2.將基質(zhì)膠均勻鋪滿(mǎn)96孔板底。注意：槍頭需提前預(yù)冷半小時(shí)。盡量在冰上操作，避免基質(zhì)膠過(guò)早固化，避免氣泡產(chǎn)生。
3.將96孔板在細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育30min，固化基質(zhì)膠。
4.消化HUVEC細(xì)胞，并計(jì)數(shù)。
5.將200µL的HUVEC細(xì)胞懸液（含5X10^4個(gè)細(xì)胞）加于含基質(zhì)膠的96孔板中。將96孔板放于培養(yǎng)箱。
6.血管樣網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)將于3至12小時(shí)間形成。
7.在血管網(wǎng)絡(luò)形成時(shí)，小心去除培養(yǎng)基，并用加入含活細(xì)胞染料1/1000 Calcein AM（綠色）的培養(yǎng)基進(jìn)行染色，并用顯微鏡進(jìn)行拍照記錄。
三、神經(jīng)軸突3D生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)（以大鼠胚胎神經(jīng)干細(xì)胞為例，操作所需時(shí)間為2小時(shí)）
1.取孕期12-15天的大鼠胚胎，用眼科剪和眼科鑷分離出大腦皮層于4°C預(yù)冷的DMEM培養(yǎng)基中。
2.用吸管輕緩吹打，然后用70µm濾網(wǎng)過(guò)來(lái)，獲得單細(xì)胞懸液，并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
3.離心（300g，3min），棄上清。將細(xì)胞與基質(zhì)膠進(jìn)行混合，然后將基質(zhì)膠混合物滴加在24孔板中，每孔50µl。
4.將24孔板放于培養(yǎng)箱，大約10min后，基質(zhì)膠將凝固。加入1mL神經(jīng)元分化培養(yǎng)基：Neurobasal medium，2% B27, 2mM L-glutamine，5%FBS，20ng/mL EGF和20ng/mL bFGF，100U/mL penicillin和100 µg/mL streptomycin。第二天開(kāi)始，就能觀察到有明顯的神經(jīng)軸突生長(zhǎng)。
5.在第7天可觀察到大量的神經(jīng)突（Neurite）長(zhǎng)出。
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