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產(chǎn)品簡介

本品采用雙抗夾心法檢測樣本中 Benzonase 含量。將 Benzonase 特異性抗體預(yù)包被在微孔板上，使用時將標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本分別加入到已包被特異性抗體的反應(yīng)孔內(nèi)，樣本中的 Benzonase 會與微孔板中的抗體結(jié)合，孵育后洗滌以去除微孔板內(nèi)未結(jié)合的物質(zhì)，加入 Benzonase 檢測抗體（HRP 標(biāo)記），形成抗體 - 抗原 -HRP 標(biāo)記抗體的復(fù)合物，加入 TMB 進行孵育顯色，顯色程度與 Benzonase 濃度成比例關(guān)系，通過測定 Benzonase 標(biāo)準(zhǔn)品的顯色來判斷樣本中 Benzonase 殘留程度。

檢測范圍： 0.094~6 ng/ml

定量限： 0.094 ng/ml

檢測限： 0.019 ng/ml

產(chǎn)品組成：

組分	組分 ( 中文 )	規(guī)格
Benzonase Standard	Benzonase 標(biāo)準(zhǔn)品	1000 ng/ml, 0.8 ml, 1 Vial
Benzonase Detection Antibody (HRP labeled)	Benzaonase 檢測抗體（HRP 標(biāo)記）	12 ml, 1 Vial
TMB Substrate	TMB 底物	12 ml, 1 Vial
Stop Solution	終止液	12 ml, 1 Vial
Sample Diluent	樣品稀釋液	50 ml, 1 Vial
Wash Buﬀer (20×)	漂洗液	50 ml, 1 Vial
Microtiter Plate (Coated)	預(yù)包被酶標(biāo)板	96 孔 , 1 Plate

所需器材：酶標(biāo)儀、微孔板恒溫振蕩器、渦旋振蕩器、移液器、封板膜等。

試劑配制

1. 平衡：將所需試劑轉(zhuǎn)移到室溫（25 ± 3℃) 平衡至少 30 min；確定測定運行的孔數(shù)，取出所需的酶標(biāo)條，其它放回裝有干燥劑包的鋁箔袋中，然后重新密封并置于 2~8℃保存。

2. 1 × 漂洗液配制：根據(jù)本次試驗所需洗板液體積，量取漂洗液（20× )適量，用去離子水按照 1:20 體積比稀釋，混勻后備用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制（示例）：

序號	標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ng/ml）	標(biāo)準(zhǔn)液體積(μl）	稀釋液體積(μl）	總體積(μl）	終濃度（ng/ml）	剩余體積(μl）
StA	1000	20	180	200	100	170
St8	100	30	470	500	6	250
St7	6.0	250	250	500	3.0	250
St6	3.0	250	250	500	1.5	250
St5	1.5	250	250	500	0.75	250
St4	0.75	250	250	500	0.375	250
St3	0.375	250	250	500	0.188	250
St2	0.188	250	250	500	0.094	250
St1(Blank)	/	/	300	300	0	300

實驗流程

1. 混勻：臨用前將平衡至室溫的試劑輕輕混勻。

2. 加樣：分別加入 100 μl 標(biāo)準(zhǔn)品溶液 (St1~St8) 或待測樣品至相應(yīng)孔中，加蓋或封板膜封板后在室溫（25 ± 3 ℃)條件下 400~500 rpm 孵育 1 h。

3. 洗滌：甩掉孔內(nèi)液體，每孔加入至少 1× 漂洗液 350 μl （可用多通道移液器或者洗瓶），再甩去孔內(nèi)液體后于無塵紙上輕拍至拍干。重復(fù) 3 次。（注意：在加入 Benzonase 檢測抗體溶液前勿使板孔長時間過分干燥。洗滌不當(dāng)可能使復(fù)孔間 CV 值偏大，信號偏高或偏低）。

4. 標(biāo)記：每孔加入 Benzonase 檢測抗體（HRP 標(biāo)記）溶液 100 μl ，加蓋或封板膜封板后在室溫（25 ± 3℃ )條件下 400~500 rpm 孵育 30 min。

5. 洗滌：甩掉孔內(nèi)液體，每孔加入至少 1× 漂洗液 350 μl （可用多通道移液器或者洗瓶），再甩去孔內(nèi)液體后于無塵紙上輕拍至拍干。重復(fù) 3 次。（注意：在加入 TMB 底物前勿使板孔長時間過分干燥）

6. 顯色：每孔加入 TMB 底物 100 μl ，室溫（25 ± 3℃)避光顯色 20 min。

7. 終止：每孔加入終止液 100 μl，輕輕敲擊孔板使混勻，終止反應(yīng)。 8. 測定：加入終止液后 10 min 內(nèi)，在 450 nm 波長處讀取吸光值。

結(jié)果計算

本品建議采用濃度取 10 為底的對數(shù)后采用四參數(shù) Logistic 模型擬合方式進行擬合計算。

標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）	吸光值
標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）	測定 1	測定 2	均值
6	1.770	1.778	1.774
3.0	1.088	1.153	1.121
1.5	0.704	0.658	0.681
0.75	0.386	0.417	0.401
0.375	0.241	0.241	0.241
0.188	0.154	0.169	0.161
0.094	0.116	0.122	0.119
0	0.082	0.082	0.082

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜（四參數(shù) Logistic 模型）

產(chǎn)品性能

檢測限：0.019 ng/ml。將 20 個空白對照的平均吸光值加上 2 個標(biāo)準(zhǔn)偏差后代入標(biāo)曲確定。

定量限： 0.094 ng/ml。確保變異系數(shù) (n=6) 在 20% 以內(nèi)的最低濃度。

線性：測定不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，并繪制曲線， R2≥0.98。

重復(fù)性：三個已知濃度樣品重復(fù)測試 20 次，評估重復(fù)性。

中間精密度：三個已知濃度樣品不同時間不同人測試 4 次，評估中間精密度。

名稱	重復(fù)性（n=20）			中間精密度（n=4）
名稱	低濃度	中間濃度	高濃度	低濃度	中間濃度	高濃度
均值（ng/ml）	0.28	0.92	4.55	0.28	0.92	4.49
SD	0.035	0.075	0.371	0.037	0.078	0.343
CV（%）	12.4	8.2	8.1	13.1	8.6	7.6

注意事項

1. 本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于臨床診斷或治療。

2. 試劑應(yīng)該按照標(biāo)簽標(biāo)明的條件進行儲存，試劑和待測樣本使用前應(yīng)平衡至室溫。

3. 預(yù)包被酶標(biāo)板使用前，應(yīng)平衡至室溫后再打開包裝袋取用，剩余的板條應(yīng)立即放回包裝中重新密封，置于 2~8℃保存。剩余試劑也應(yīng)重新密封后按標(biāo)簽標(biāo)明的條件進行儲存。

4. Benzonase 標(biāo)準(zhǔn)品、 Benzonase 檢測抗體（HRP 標(biāo)記）溶液應(yīng)混勻后再使用。

5. 洗滌過程中板孔殘留的液體應(yīng)在潔凈的無塵紙上拍干，拍干后的板孔不宜長時間過分干燥，否則不恰當(dāng)?shù)南礈爝^程會造成復(fù)孔的 CV 值偏高或者空白（0 ng/ml）吸光值偏高，影響結(jié)果準(zhǔn)確性。

6. TMB 底物應(yīng)該是無色透明液體，如果顯示淡藍色，證明該溶液已經(jīng)被污染，不適合進行后續(xù)分析使用。

7. 樣本處在極端 pH 值（<5.0 或 >8.5），或者含高鹽、高聚糖、高尿素、高有機溶劑和高的去污劑的溶液中，均有可能導(dǎo)致較低回收率。

8. 由于生物樣本基質(zhì)的復(fù)雜性，建議每次試驗加陽性質(zhì)控試驗樣品，確保試驗的準(zhǔn)確性，并采用復(fù)孔進行試驗。

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