T25 細(xì)胞到貨處理
觀察：
1、收到細(xì)胞后，請(qǐng)及時(shí)核對(duì)培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng) 瓶是否有破損或漏液等異常情況。
處理：
1、75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前 三天照片為重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。
3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
4、收到細(xì)胞后，及時(shí)查看說明書是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細(xì)胞
的傳代方法操作。
懸�。�
1、將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對(duì)比培養(yǎng) 使用），加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè) T25），補(bǔ)充新的完全
培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（傳代時(shí)建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)。）
凍存細(xì)胞到貨處理
1、收到細(xì)胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。
2、正常請(qǐng)進(jìn)行以下操作：將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復(fù)蘇。
3、復(fù)蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時(shí)與我們聯(lián)系，會(huì)有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第
二管。特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
細(xì)胞復(fù)蘇
1、 從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁：
2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min;
3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中
培養(yǎng)；
4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代
1、方法一：收集細(xì)胞懸液，至離心管中 1000rpm 離心 5min，棄上清，加 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸，按 1：2 的比例進(jìn)行分瓶傳代，補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、方法二：可選用半換液方式，將 T25 瓶子豎起來，輕輕拍打兩下，在培養(yǎng)箱靜置 10 分鐘，肉眼可見大部分細(xì)胞沉在底部，輕輕吸去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按 1：
2 比例分瓶，補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm離心 5min；
2、棄上清，沉淀細(xì)胞加入 1ml/支無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。
（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）
3、將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存
放 24 小時(shí)以上。
本庫的細(xì)胞系（株）僅用于科研工作。
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