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人α烯醇化酶(α-enolase)Elisa試劑盒

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使用目的:

本試劑盒用于測定血清、血漿及相關液體樣本中的指標含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本指標水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,HRP標記的抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準

0.5ml×1

3

標包被

12孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可在小試管中進行稀釋。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

 
 
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