| 產(chǎn)品描述 |
| 種屬: 人源（Homo sapiens） 組織來源: 卵巢（Ovary） 疾病: 卵巢透明細(xì)胞腺癌（Ovarian clear cell adenocarcinoma） 年齡: 47歲（ 47 years） 性別: 女（Female） 細(xì)胞類型: 成纖維細(xì)胞（Fibroblast） 生長特性: 貼壁生長（Adherent） |
| 拆包 & 存儲 |
| 1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液 2. 請立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn) 行培養(yǎng)傳代 注意：如為凍存管，請收到后立即解凍培養(yǎng)。若來不及解凍，請 儲存于液氮中（存儲于負(fù)80度，會降低細(xì)胞存活率） |
| 培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟 |
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對于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞 ，寄送前 ，我們會將培養(yǎng)基充滿整個(gè)培 養(yǎng)瓶 ，以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞的脫落。 1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后 ，請注意觀察是否有污染 。將培養(yǎng)瓶置于倒置 顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染 。 因在運(yùn)輸過程中存 在顛簸 ，且有些細(xì)胞對溫度變化也很敏感 ，可能存在一些細(xì)胞脫 落漂浮的情況 ，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞 ，請勿丟棄 ，可離心富集后 傳代使用。 2. 對于貼壁的細(xì)胞 ，在生物安全柜環(huán)境中 ，用真空泵去除培養(yǎng)瓶 中的多余培養(yǎng)基 ，至剩余5-8mL左右 ，隨后將細(xì)胞置于含有5%CO2 的37℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) ，擰松瓶蓋 。如果細(xì)胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶 請立即傳代。 3. 對于懸浮的細(xì)胞 ，在生物安全柜環(huán)境中 ，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞 至離心管中 ，離心200×g / 5 - 10 min ，去除上清后 ，用5mL培養(yǎng)基 吹散細(xì)胞 ，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中 ，隨后置于含有5% CO2 的37℃恒 溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
| 凍存細(xì)胞操作步驟 |
注意：為保存細(xì)胞的高存活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。
1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染， 確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存 管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 離 心200×g / 5 - 10 min ，用真空泵去除含有凍存液的上清。
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證 細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。
5. 將細(xì)胞置于含有5%CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)
1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS洗滌一次。
2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3 至5分鐘（此處為12.5 cm2培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實(shí)際情況增減 用量）。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng) 瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
4. 離心200xg/5 min ，去除上清后 ，取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸, 取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中 ，并加入新鮮細(xì)胞完全培養(yǎng)基至總 體積為4mL。
5. 將細(xì)胞置于含有5%CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 傳代比例：建議 1:2 至 1:3（以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算）
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
注意：
耐藥細(xì)胞，需先無藥培養(yǎng)穩(wěn)定后保種再進(jìn)行加藥培養(yǎng)，按 照3次梯度加藥：最大劑量1/4，最大劑量1/2，最大劑量。
