注 意 ： 正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。
測定原理：
蛋白質(zhì)中的賴氨酸具有一個游離的ε-NH2，它與茚三酮試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴氨酸的含量成線性關(guān)系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同，而且僅有—個游離氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制標(biāo)準(zhǔn)液。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。
試劑的組成和配制：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入12.5mL試劑三充分溶解混勻；
試劑二：液體12.5mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：60%乙醇，自備。
賴氨酸提取：
樣本烘干粉碎，稱取約0.01g樣本，加入1mL提取液，充分勻漿。80℃水浴提取20min，冷卻后10000g離心10min，取上清待測。
測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至570nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 工作液的配制：取10mL試劑一與10mL試劑二混合搖勻，取上清備用。用不完的試劑4℃保存。
3、 在有蓋EP管中加入下列試劑：
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 空白管 |
| 樣本 | 200 |
|
| 提取液 |
| 200 |
| 工作液 | 400 | 400 |
混勻，80℃水浴30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至常溫。
| 試劑四 | 600 | 600 |
混勻，取1000μL至1mL玻璃比色皿中，于530nm波長處記錄吸光值A。△A=A測定管-A空白管。空白管只要做一管。
賴氨酸含量計算：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0062x - 0.0212；x為賴氨酸含量（µg/mL），y為吸光值。
1. 按照蛋白濃度計算
賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計算
賴氨酸含量(µg/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷W
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.2mL；V2：加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；1.1515，校正系數(shù)。
