【產(chǎn)品名稱】
通用名：禽白血病病毒P27抗原檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Avian Leukosis Virus P27 Antigen Test Kit(ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 禽白血病(Avian Ieukemia，AL)作為一種雞獨(dú)有的病癥，廣泛存在于我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)，是危害我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)的一種重要疾病。
p27蛋白是禽白血病病毒的重要組成蛋白之一，不僅構(gòu)成ALV病毒粒子的衣殼，還是ALV主要的結(jié)構(gòu)蛋白，占禽白血病病毒總蛋白含量的30%，且p27蛋白氨基酸序列高度保守，含有反轉(zhuǎn)錄病毒的群體特異性抗原，易于被檢測(cè)到。所以在企業(yè)實(shí)際生產(chǎn)實(shí)踐中，通常選擇ELISA試劑盒這種設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便的方法來對(duì)禽白血病進(jìn)行快速篩查。
本試劑盒用于檢測(cè)雞的卵清、胎糞、組織樣品及細(xì)胞培養(yǎng)物中禽白血病病毒 p27抗原。
【禽白血病病毒P27抗原檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）組成】
| 序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 | 規(guī)格/96T×2 | 規(guī)格/96T×5 |
| 1 | 酶標(biāo)記物 | 11ml×1(紅蓋) | 11ml×2(紅蓋) | 26ml×2(紅蓋) |
| 2 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1(白蓋) | 40ml×1(白蓋) | 200ml×1(透明) |
| 3 | 底物顯色液 | 10ml×1(黑蓋) | 10ml×2(棕蓋) | 25ml×2(黑蓋) |
| 4 | 終止液 | 5ml×1(黃蓋) | 10ml×1(黃蓋) | 25ml×1(黃蓋) |
| 5 | 陽性對(duì)照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
| 6 | 陰性對(duì)照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
| 7 | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
| 8 | 蓋板膜 | 1 | 2 | 5 |
| 9 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
| 10 | 說明書 | 1 | 1 | 1 |
【儲(chǔ)存及有效期】2～8℃保存，有效期12個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，25℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.樣品處理
1.1 卵清：取全蛋，破碎后取稀卵清，直接進(jìn)行檢測(cè)。凍融可以降低卵清的粘稠度。
1.2 胎糞：將胎糞放入含有0.5ml工作洗滌液的離心管中，反復(fù)凍融 2 次。恢復(fù)室溫后，5000r/min離心2分鐘，取上清進(jìn)行檢測(cè)。
1.3 組織樣品：取0.5g組織病料于研磨器劇中，加入0.5ml工作洗滌液勻漿，將組織懸液轉(zhuǎn)移至離心管中反復(fù)凍融 2 次，5000r/min離心2分鐘，取上清進(jìn)行檢測(cè)。
1.4 細(xì)胞培養(yǎng)物：將細(xì)胞培養(yǎng)物反復(fù)凍融 2 次。恢復(fù)室溫后，5000r/min離心2分鐘（若為細(xì)胞培養(yǎng)板，則需靜置30分鐘），取上清進(jìn)行檢測(cè)。
2.洗滌液的配制
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。
【禽白血病病毒P27抗原檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性、陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加100μl。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置室溫（20～25℃）（推薦水浴）避光反應(yīng)1小時(shí)。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加300μl工作洗滌液，無需靜置，甩掉板孔中的洗滌液，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置室溫（20～25℃）避光反應(yīng)1小時(shí)。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔加入底物顯色液100μl，置室溫( 20～25℃)避光反應(yīng)15分鐘。
9.每孔加入終止液50μl，混勻，10分鐘內(nèi)于630nm測(cè)定各孔吸光值。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)＜0.2，陽性對(duì)照的平均OD值即ODPC應(yīng)大于≥0.5
S為樣品孔OD630nm值，P為陽性對(duì)照OD630nm平均值。
如果S/P＞0.2，判為陽性；
如果S/P≤0.2，判為陰性。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)禽白血病病毒P27抗原，根據(jù)S/P值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。
3.若試劑盒陰陽性對(duì)照、酶標(biāo)記物出現(xiàn)少量懸浮物，屬于正�，F(xiàn)象。
4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
5.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
6.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
7.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
9.不同批號(hào)試劑組分不得混用。
