復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL MNP維持培養(yǎng)基（含10μM IMC-014-Y）混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL MNP維持培養(yǎng)基（含10μM IMC-014-Y）后混勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量MNP維持培養(yǎng)基（含10μM IMC-014-Y）的基質(zhì)膠包被的六孔板（1孔）或35mm皿中培養(yǎng)過夜。24h后，換成不含IMC-014-Y的MNP維持培養(yǎng)基，視培養(yǎng)基顏色或隔2天換液。
細(xì)胞傳代：（可按培養(yǎng)器皿底面積 1:6 比例接種傳代）：細(xì)胞傳代（可按培養(yǎng)器皿底面積1:6比例接種傳代）：
1、棄去培養(yǎng)基，每孔加入1mL Accutase（含10μM IMC-014-Y），置于37℃培養(yǎng)箱消化4-5min。
2、4-5 min后每孔加入等量 MNP維持培養(yǎng)基（含10μM IMC-014-Y），輕輕吹打細(xì)胞，使細(xì)胞解離成單細(xì)胞。
3、將細(xì)胞懸液收集到15 mL離心管中，室溫下300 g離心5 min。
4、仔細(xì)抽吸上清液，不干擾細(xì)胞，用1mL恢復(fù)室溫的MNP維持培養(yǎng)基重懸細(xì)胞（含10μM IMC-014-Y），輕輕地上下移液以確保細(xì)胞溶液均勻。
5、使用MNP維持培養(yǎng)基（含10μM IMC-014-Y）稀釋細(xì)胞，將細(xì)胞以1:6比例接種到基質(zhì)膠包被的六孔板或35mm皿中培養(yǎng)過夜（按底面積算，1個(gè)T25相當(dāng)于六孔板2.5個(gè)孔，六孔板1孔可傳12孔板的2孔，24孔板的4孔，96孔板的6孔）。24h后，換成不含IMC-014-Y的MNP維持培養(yǎng)基，視培養(yǎng)基顏色或隔2天換液。
培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h。
4. 客戶可購買MNP維持培養(yǎng)基（含MNP維持基礎(chǔ)培養(yǎng)基 ；MNP維持培養(yǎng)基補(bǔ)充劑A（200×） ；MNP維持培養(yǎng)基補(bǔ)充劑B（50×）
5. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑�，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
6.該細(xì)胞僅供科研使用。
