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AU565人乳腺癌細(xì)胞【已通過(guò)STR鑒定】

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細(xì)胞來(lái)源

ATCC

凍存條件

細(xì)胞庫(kù)無(wú)血清凍存液

細(xì)胞背景

STR鑒定正確

AU565 細(xì)胞系源自加利福尼亞州奧克蘭海軍生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)室的乳腺癌患者胸腔積液。該細(xì)胞系是從與 SK-BR-3 ( ATCC HTB-30 ) 相同的患者建立的。該患者是一名白人女性,43 歲,A+ 型血,曾接受放射、類(lèi)固醇、環(huán)磷酰胺和 5-氟尿嘧啶治療。AU565細(xì)胞系擴(kuò)增并過(guò)表達(dá)HER-2/neu癌基因;它表達(dá) HER-3、HER-4 和 p53 癌基因。用霉酚酸 (MPA)、佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯 (PMA)、視黃酸 (RA) 或針對(duì) HER-2/neu 蛋白胞外結(jié)構(gòu)域的 TA-1 單克隆抗體處理細(xì)胞可誘導(dǎo)細(xì)胞分化。用 Neu 分化因子 (NDF) 處理 AU565 細(xì)胞也會(huì)誘導(dǎo)成熟表型,其特征在于細(xì)胞的形態(tài)外觀。未經(jīng)處理的 AU565 細(xì)胞具有致密的細(xì)胞核和薄的細(xì)胞質(zhì),而處理的細(xì)胞則表現(xiàn)出與分化表型相關(guān)的形態(tài),例如被相當(dāng)大的細(xì)胞質(zhì)包圍的扁平大細(xì)胞核。

本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作,未經(jīng)許可不得用于其他目的,使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 

培養(yǎng)備注

用無(wú)菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過(guò)渡培養(yǎng)

 

細(xì)胞收到后處理:

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開(kāi)外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察:未超過(guò)80%匯合度時(shí),可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松)

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,完全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS:若客戶收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若密度未超過(guò)80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。

 
 
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