細(xì)胞名稱	人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞-永生化
貨號(hào)	YS0884
種屬	人
組織來源	視網(wǎng)膜
永生化方法	轉(zhuǎn)入 Sv40 和 hTERT 基因
生長(zhǎng)方式	貼壁
安全性	所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)
培養(yǎng)	培養(yǎng)基：內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液
	配套培養(yǎng)基：（YS-1304）
	溫度：37℃
	氣相：95%空氣，5%二氧化碳
傳代	收到細(xì)胞后，請(qǐng)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)瓶外表進(jìn)行消毒，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行 1-2 小時(shí)的緩
	沖，待細(xì)胞恢復(fù)基本生長(zhǎng)狀態(tài)后，進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
	在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：
	（一）細(xì)胞未長(zhǎng)至 85%時(shí)，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到生物操作臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無
	菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，若培養(yǎng)瓶上無特殊標(biāo)注，吸去剩余培養(yǎng)液，只留 6-8ml培
	養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
	（二）細(xì)胞已長(zhǎng)滿（達(dá) 85-95%）。即可進(jìn)行傳代，具體步驟如下：
	1.棄去培養(yǎng)液，用 PBS 洗滌 1-2 次，
	2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞回縮變圓、
	透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落，則迅速拿回操作臺(tái)，加入雙倍的含 10%血清的完全培
	養(yǎng)液，終止消化并輕輕吹打細(xì)胞，使其變成單細(xì)胞懸液，
	3.將細(xì)胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min，棄上清，輕彈管底，將細(xì)胞彈散，
	4.加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代、凍存，
	5.如果沒有特別說明，建議收到細(xì)胞后的第一次傳代比例為 1:2。
	注：1.觀察細(xì)胞密度最好用（4X物鏡）低倍鏡觀察，以便正確的判斷細(xì)胞密度；觀
	察細(xì)胞形態(tài)請(qǐng)用（10X 或 20X）高倍鏡觀察；
	2.瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)；
	3.有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶?jī)?nèi)；
	4.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。
保存	凍存條件：70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%胎牛血清+10%DMSO  保存條件：液氮存儲(chǔ)
供應(yīng)限制	僅供研究之用
常見問題	1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師
及	解決。
解決方案